尿液标本经2500r/min离心10min,以除去细胞碎片,收集上清液。由于尿液中含有PCR抑制剂,因此需用聚乙二醇PEG6000进行预处理:50μl尿上清与50μl 20%PEG6000和25μl 2mol/L NaCl混合,置冰浴中6h;15000r/min离心30min收集沉淀。再于6400r/min离心3min;尽可能吸去上清,将沉淀悬浮于蒸馏水中。该悬液可直接用于PCR扩增;扩增时应于100℃加热10min,迅速置冰浴中冷却。
采集的标本包括患者的血液、尿,以及腺体组织等。由全血制备的血沉棕黄层buffy coats可保存于-80℃;尿液标本可保存于液氮中。冻存标本应避免反复冻融。
一标本的采集及处理
四、聚合酶链式反应PCR
已广泛应用于检测CMV,其中以32P标记的探针敏感性高,对某些标本来说,杂交方法可能比病毒分离更敏感。
三、DNA探针
常用的有补体结合试验CF、间接免疫荧光试验IIF、免疫酶试验EIA、间接血凝试验IHA和放射免疫试验RIA等检测CMV-IgG和IgM抗体。当单份血清标本已确定既往有CMV感染时,应当立即留血清标本,以及间隔2周、4周、8周再留血清标本,结合病毒分离可作原发感染诊断。
二、血清抗体检测
好用唾液、尿液、生殖道分泌物、乳汁和白细胞,接种到人的成纤维细胞内繁殖和分离,细胞病变效应CPE在1天或数周后出现,经固定和HE染色后可观察到巨细胞,核内有内包涵体,核周晕圈及嗜酸性胞浆内包涵体,很象“猫头鹰眼”owl′s eye亦可用单克隆或多克隆抗体的荧光染色等方法检查。
一、病毒分离